Burkina Faso Ouagadougou, Bobo-Dioulasso

Le projet consiste à développer une production pilote pour la production de PSA (Promastigote surface antigen), une protein vaccinale candidate pour lutter contre les leishmanies à partir d’un système eucaryote Nicotiana tabacum transformé transitoirement par Agrobacterium tumefaciens. Ce projet sera réalisé au Burkina Faso à l’INERA sur le site de Kamboinsé dans le laboratoire de virologie et biotechnologies végétales dirigé par le Pr G. Konaté .

Titre du programme : Projet d’une plateforme pour la production de protéines recombinantes à l’INERA Burikina Faso.

• UMR 186. RPB : Résistance des plantes aux bioagresseurs (dépt DER)

Christophe Brugidou (DR2),

• UMR 177 IRD/CIRAD : « Trypanosomatidae de l’homme, l’animale et des plantes » (Dépt DSS)

Jean-loup Lemesre (DR1),

• Laboratoire partenaire de virologie et Biotechnologie des plantes (INERA- Burkina Faso).

Drissa Sérémé (CR2 INERA, ancien BESTD-IRD), Moumouni Konaté (Tech-INERA, ancien BEST-IRD- INERA), Professeur Gnissa Konaté (INERA).

• Industriel partenaire VIRBAC …

Coordinateurs : C. Brugidou/JL Lemesre

Correspondance : brugidou@mpl.ird.fr

Le projet consiste à développer une production pilote pour la production de PSA (Promastigote surface antigen), une protein vaccinale candidate pour lutter contre les leishmanies à partir d’un système eucaryote Nicotiana tabacum transformé transitoirement par Agrobacterium tumefaciens. Ce projet sera réalisé au Burkina Faso à l’INERA sur le site de Kamboinsé dans le laboratoire de virologie et biotechnologies végétales dirigé par le Pr G. Konaté . Sur place ce projet bénéficiera d’un personnel compétent :

-avec le Dr Drissa Sérémé, chercheur INERA, qui a réalisé sa thèse dans les équipes de C. Brugidou et D. Fargette (Bourse BSTD-IRD, Centre IRD de Montpellier) sur la caractérisation des suppresseurs de silencing et les applications en biotechnologies.

-avec Moumouni Konaté , technicien INERA qui a bénéficié d’une bourse BEST-IRD de formation continue dans le domaine des OGM (production et biosécurité) dans l’équipe de C. Brugidou.

Actuellement le système de production dans les plantes passe par une expression constitutive, qui seule permet de récupérer suffisamment de protéines recombinantes. L’inconvénient c’est qu’on ne connaît pas a priori si le rendement de production sera suffisant et si la protéine recombinante sera fonctionnelle. L’incertitude sur le niveau de production, le coût élevé pour développer des plantes transgéniques et le délai trop long pour analyser les plantes sont des sérieux freins qui limitent l’utilisation de protéines recombinantes chez lez plantes. A cela s’ajoute une autre contrainte avec le mécanisme de régulation post-transcriptionnelle « post transcriptional gene silencing » (PTGS) qui limite l’expression de protéines recombinantes en dégradant spécifiquement les ARNm codant pour cette protéine ( Baulcombe D., 2005).

Nos travaux soutenus par l’ANR (ANR-05-EMPB-003/01 : Protéines Récombinantes ), par le DEV, puis par une action incitative 2009 DRV-DSS ((Expression de protéines vaccinale chez les plantes, pour la recherche et la production : application à la production d’une protéine vaccinale anti-leishmaniose) ont permis de répondre à ces deux inconvénients:

-d’une part, par une expression transitoire de la protéine recombinante chez le tabac , et

-d’autre part, en co-exprimant des protéines suppresseurs de silencing qui permettent d’éviter la dégradation du transgène. Ces résultats sont couverts par un portefeuille de brevet qui protége la production dans les plantes et la PSA.

- De plus, l’utilisation d’un amplicon viral (en cours de mise au point) devrait faciliter la production en expression transitoire.

Ainsi, nous produisons la protéine PSA (Promastigote Surface Antigen) native de 53 kDa grâce à la découverte d’un cocktail de protéines suppresseurs de silencing qui permet la pleine expression du transgène .

Les travaux récents de la thèse de Drissa Sérémé (La protéine suppresseur P1 des virus de la panachure jaune du riz et du chiendent (Imperata cylindrica ): diversité, étude fonctionnelle et applications en biotechnologies) récompensé par le FRIST 2010 (Forum National de la Recherche Scientifique et des Innovations Technologiques) et qui ont fait l’objet d’un dépôt de brevet IRD-INERA sur l’obtention d’hyper-suppresseurs utiles pour des applications en biotechnologie vont sans doute permettre d’optimiser le cocktail de suppresseurs et donc la production de PSA. Si le projet est concluant il devrait déboucher , avec le soutien du Département DEV de l’IRD, sur la mise en place d’une start -up pour la production de protéine s recombinantes d’intérêt pour l’Afrique de l’Ouest.

Publications relatives au programme en cours :

Drissa Sérémé, Moumouni Konaté, Denis Fargette, Jean Loup Lemesre, Gnissa Konaté, Brugidou Christophe : Bio-production d'une protéine d'intérêt vaccinale (PSA, promastigote surface antigen ) en utilisant la protéine suppresseur de silencing de deux phytovirus : le virus de la panachure jaune du riz et le virus de la panachure jaune du chiendent.. FRISP 2011 Bobo-Dioulasso.

Drissa Sérémé : La protéine suppresseur P1 des virus de la pachure jaune du riz et du chiendent (Imperata cylindrica ) : diversité, étude fonctionnelle et applications en biotechnologies, 2010, thèse ES-Sciences biotechnologiques appliquées, Université de Ouagadougou.

Drissa Sérémé, Martine Bangratz, Agnes Pinel-Galzi, Moumouni Konaté, Séverine lacombe, Denis Fargette, Alfred Traoré, Christophe Brugidou, Gnissa Konaté. 2011. Diversity and implications of sites under positive selection in the RNA silencing suppressor activity of rice yellow mottle virus movement protein P1. Soumis à Journal General of Virology.

Drissa Sérémé, Séverine Lacombe, Florence Vignols, Gnissa Konaté, Alfred Traoré, Christophe Brugidou. 2009. Les suppresseurs du RNA silencing des phytovirus : caractérisation et mode d’action. Virologie, 2009, 13 (6), p. 305-316.

Drissa Sérémé, Fargette Denis, Lemesre Jean Loup, Konaté Gnissa, Brugidou Christophe. 2009. Moyens pour la production transitoire dans les plantes de protéines recombinantes utilisables notamment en prophylaxie et en thérapeutique »FR 10/02204, PCT/IB2011/052288.

Drissa sérémé, Séverine Lacombe, Moumouni Konaté, Agnes Pinel-Galzi, Valentin Stanislas Edgar Traoré, Eugénie Hébrard, Oumar Traoré, Christophe Brugidou, Denis Fargette, Gnissa Konaté. 2008. Biological and molecular characterization of a new putative sobemovirus infecting Imperata cylindrica and maize in Africa. Archives of Virology 153 : 1813-1820.

Contact : Christophe BRUGIDOU ( christophe.brugidou@ird.fr )